Dados do Trabalho

Título

PCR EM TEMPO REAL MULTIPLEX NA DETECÇÃO DE ADULTERAÇÃO DE ESPÉCIES EM IOGURTE

Introdução

A identificação de espécies em alimentos garante a segurança econômica e de saúde do consumidor. Nos produtos lácteos, a adulteração pode ocorrer pela adição de matéria prima de menor valor comercial, como a adição do leite de vaca, em produtos de maior valor agregado, como derivados de leite de ovelha, cabra ou búfala. A detecção de DNA em leite é desafiadora e o processo produtivo de iogurtes dificulta mais a análise. Assim, esse trabalho objetivou validar um protocolo de PCR em tempo real (qPCR) para detecção de espécies em iogurtes, que foram produzidos no Instituto SENAI de Alimentos e Bebidas em Chapecó, SC com leites bovino, caprino, ovino e bubalino previamente testados e sem adulteração.

Material e Métodos

Os iogurtes de cabra, ovelha e búfala foram contaminados com iogurte de vaca em diferentes proporções: 1) 97,5% de iogurte da espécie de maior valor comercial + 2,5% de iogurte de vaca, 2) 99% de iogurte da espécie + 1% de iogurte de vaca e 3) 99,5% de iogurte da espécie + 0,5% de iogurte de vaca. A extração de DNA e corrida de qPCR foram realizadas conforme protocolos previamente padronizados em amostras de leite, testando as amostras de iogurte em triplicatas.

Resultados e Discussão

O DNA bovino foi detectado em todas as amostras. Os valores de ciclo de quantificação (Cq) de DNA bovino e de DNA das espécies não demonstraram padrão relacionado à concentração de matriz bovina utilizada na contaminação. Os controles branco de extração e PCR amplificaram DNA bovino, com Cq superior àquele obtido nas amostras, sugestivo de amplificação inespecífica devido à formação de dímeros, visto que, isto não aconteceu para os demais pares de primers das outras espécies. Estes testes foram repetidos e os mesmos resultados obtidos, o que demonstra necessidade de reavaliação in silico do par de primers para espécie bovina, para novos testes serem propostos.

Conclusão

Os resultados indicam que o protocolo utilizado demonstra alta sensibilidade na matriz iogurte, mesmo com adição de pequena quantidade de espécie adulterante. No entanto, sugere-se a realização de novas avaliações nos primers para espécie bovina, determinação de limite de detecção e validar em um número amostral maior.