Dados do Trabalho

Título

VALIDAÇÃO DE MÉTODO MOLECULAR PARA DETECÇÃO DE Staphylococcus aureus PRODUTOR DE TOXINA DO CHOQUE TOXICO INDEPENDETE DE CULTURA MICROBIOLÓGICA DO LEITE

Introdução

Em alimentos, patógenos como Staphylococcus aureus podem produzir toxinas estafilocócicas, como a do choque tóxico (TSST-1), que podem comprometer a segurança para o consumo mesmo nos derivados tratados termicamente. O objetivo deste estudo foi validar um ensaio biomolecular para detecção do gene tst, que codifica a síntese da TSST-1, em amostras de leite independentemente de cultura microbiológica específica.

Material e Métodos

Um isolado sabidamente positivo para o gene tst foi preparado até a concentração 2 da escala de McFarland. Esse inóculo foi decimal e sequencialmente diluído até a concentração 10-10. As diluições foram plaqueadas em duplicata pelo método pour plate em ágar padrão para contagem e o resultado determinado em 3,1 x 108 UFC/mL. Um mL de cada diluição foi submetido à extração de DNA e PCR para o gene tst, de forma a determinar a sensibilidade analítica do ensaio molecular.

Resultados e Discussão

A PCR qualitativa detectou até 3,1 isolados por mL (1 mL da diluição 10-8). Paralelamente, uma alíquota de 1 mL do inóculo na concentração 2 da escala de McFarland foi adicionado à 99 mL de leite em pó desnatado reconstituído a 10% estéril. Esse leite inoculado também foi diluído e a contagem foi determinada em 2,6 x 107 UFC/mL após o plaqueamento. As diluições do leite também foram submetidas à PCR para o gene tst, para o qual foi determinada a sensibilidade de 2,6 x 104 UFC/mL. A grande diferença de sensibilidade entre o inóculo puro e no leite pode estar relacionada a interferência de componentes da matriz de extração, como as proteínas do leite, que podem ter apresentado alguma ligação com o inóculo e foram removidas durante o procedimento de extração de DNA.

Conclusão

Assim, a pesquisa molecular do gene tst de S. aureus em amostras de leite apresentará resultados positivos somente se este estiver presente em grandes quantificações. Estudos futuros, verificando se a etapa de pré-enriquecimento da amostra poderia influenciar no índice de detecção ou a alteração do método de extração que inclua alguma etapa de desnaturação proteica, poderão ser agora executados para aumentar a sensibilidade do método molecular para sua possível aplicação no controle da qualidade de leite e derivados.