Dados do Trabalho

Título

DESEMPENHO DE ENZIMAS PROTEOLÍTICAS DO LÁTEX DO AVELOZ (Euphorbia tirucalli) NA HIDRÓLISE DE PROTEÍNAS VEGETAIS

Introdução

O látex do aveloz contém metabólitos como terpenóides, fenólicos, peroxidases e indícios da presença de proteases. As aplicações das proteases abrangem as indústrias de detergentes, farmacêutica, cosméticas, agroquímica e alimentícias, devido à sua capacidade de catalisar reações específicas, como na síntese enantiosseletiva, de reduzir intermediários indesejados e produzir compostos de alta pureza. Posto que as proteases estão entre as enzimas mais demandadas do mercado industrial, neste estudo foi avaliada a presença de proteases no látex do aveloz por meio da determinação do grau de hidrólise (GH) de proteínas vegetais após a clivagem enzimática.

Material e Métodos

O látex do aveloz, coletado de incisões superficiais de caules jovens, foi imediatamente clarificado por centrifugação (20.000g/30min) e armazenado a -20±2 °C. As condições ótimas da atividade enzimática foram determinadas pela avaliação dos efeitos do pH (pH; 6.5, 7.5 e 8.5), temperatura (T; 37, 44 e 51 °C) e tempo (t; 60, 150 e 240 min) na hidrólise do concentrado de proteínas de arroz (84 %, m/m) usando-se um planejamento experimental Box-Behnken. A metodologia de superfície de resposta foi aplicada para otimizar o GH. A hidrólise das proteínas vegetais (pequi (77 %, m/m), soja (79 %, m/m), ervilha (83 %, m/m) e arroz (84 %, m/m)) foi efetuada a partir de dispersões proteicas de 0.2 % (m/v) em tampão fosfato salino (pH 7.4) na proporção de 1:5 (enzima:substrato) atingindo volume final de 1.5 mL. Após a hidrólise as enzimas foram inativadas adicionando-se 1.5 mL de solução de ácido tricloroacético (20 %, m/v). A mistura foi incubada (4 °C/30min) e centrifugada (7.100g/15min). O teor de proteínas no sobrenadante foi determinado pelo método de Bradford usando-se uma curva padrão com albumina de soro bovino.

Resultados e Discussão

As condições ótimas para a atividade enzimática de proteases foram em pH=7.5, T=44°C e t= 150min. Nessas condições, o grau de hidrólise foi de 2.6, 2.1, 1.7 e 1.2 % para proteínas de ervilha, arroz, soja e pequi, respectivamente.

Conclusão

Portanto, a hidrólise de proteínas vegetais permitiu identificar a atividade enzimática de proteases presentes no látex do aveloz, observando-se que o potencial de hidrólise proteica por clivagem com proteases foi maior em proteínas da ervilha.