Dados do Trabalho

Título

PURIFICAÇÃO DA LECTINA DE BANANA USANDO UMA COLUNA MONOLÍTICA SUPERMACROPOROSA

Introdução

Em 1990 foi realizado um estudo por Koshte e colaboradores, onde foi observado a presença de uma proteína que aglutinava hemácias de coelho sendo denominada de BanLec. A BanLec é uma glicoproteína que se liga reversivelmente a carboidratos presentes nas superfícies de algumas substâncias ou células do organismo, possui diversas funções biológicas e estas funções são exercidas através da capacidade das lectinas em se ligar a açúcares presentes em células vegetais e animais. Alguns estudos têm sido realizados com o objetivo de melhorar o isolamento desta proteína de banana, isso devido as suas variedades de aplicações, como por exemplo sua capacidade antimicrobiana, antiviral, antitumoral, entre outras. Deste modo, o presente estudo tem como objetivo avaliar a purificação da lectina presente no fruto da banana da Terra (Musa spp.) utilizando uma coluna monolítica supermacroporosa.

Material e Métodos

Foi utilizado solução de 1,3-diaminopropano (20 mM),100g de polpa da banana triturada em liquidificador, centrifugados a 6000 G/15 minutos a 4ºC, sendo o sobrenadante considerado o extrato de banana. Para o ensaio de purificação foi utilizado o sistema cromatográfico Äkta Pure 25 L (GE Healthcare, Upsalla, Suécia) em triplicata monitorado a 280 nm em uma vazão de 1,5 mL.min-1 a 25º C. Como fase móvel tampão fosfato de sódio (20 mM pH 7,2) e para eluição uma solução de glicose com 0,5 M. Os picos de eluição coletados foram dialisados contra água e congelados para posteriores análises. Para quantificar a lectina do extrato e purificados realizou-se Eletroforese em gel de poliacrilamida (SDS-PAGE), HPLC com coluna de exclusão molecular e ensaio de hemaglutinação com sangue de coelho (3%).

Resultados e Discussão

Na SDS-PAGE foi é observado uma banda de 14,5 kDa característico da BanLec, confirmada no HPLC com uma concentração de 30,11 mg.g-1 de BanLec. O teste de hemaglutinação foi positivo até um título de 64 HU com 52,89 HU/(mg.mL-1). Estudos anteriores apresentaram características quanto a massa molar e teste positivo para hemaglutinação e conseguiram uma massa de lectina menor por volta de 0,025 mg.g-1 de BanLec, ao contrário do encontrado neste estudo. Sendo assim, conclui-se a eficiência da coluna monolítica supermacroporosa para purificação da BanLec com alta concentração desta proteína.

Conclusão

Estudos anteriores apresentaram características quanto a massa molar e teste positivo para hemaglutinação e conseguiram uma massa de lectina menor por volta de 25 μg de BanLec, ao contrário do encontrado neste estudo. Sendo assim, conclui-se a eficiência da coluna monolítica supermacroporosa para purificação da BanLec com alta concentração desta proteína.